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F(ab)2含量測定

1 試劑 1.1 丙烯酰胺溶液 取丙烯酰胺14g,雙丙烯酰胺0.367g,加蒸餾水至50ml。 1.2 緩沖液 Ph7.2,0.2mol /L PB-0.2%SDS:取NaH2PO4·2H2O17.8g,Na2HPQ4·12H2O103g,SDS4g,加蒸餾水至2000ml。 1.3 樣品結合液 取10%SDS4ml,0.2mol/L PB0.2ml,甘油10ml,加蒸餾水至20ml。 1.4 電極緩沖液 取上述1.2項緩沖液稀釋1倍。 1.5 固定液 取甲醇400ml,冰醋酸70ml,加蒸餾水至1000ml。 1.6 染色液 取考馬斯亮藍2.5g,溶于500ml甲醇中,加冰醋酸70ml,再加蒸餾水至1000ml。 1.7 脫色液 取冰醋酸70ml,甲醇50ml,加蒸餾水至1000ml。 1.8 干燥液 取甘油30ml,甲醇200ml,加蒸餾水至1000ml。 2 操作 2.1 樣品處理 取一定蛋白質濃度的樣品0.1ml,加樣品結合液0.1ml,100℃翥沸1~2分鐘,或37℃2小時,冷卻。 2.2 凝膠板制備 按下列比例制備所需量凝膠溶液∶0.2mol /L PB∶丙烯酰胺溶液∶水∶1.5%過硫酸銨=2∶1∶0.8∶0.25。最后加1~2滴四甲基乙二胺(TEMED),混勻后立即將膠液加入電泳槽的玻璃板間,要避免產生氣泡。 2.3 加樣 于每一樣品孔內加入已經處理過的樣品25μg蛋白。 2.4 電泳 電泳條件為每個樣品孔的電流恒定為2~3mA。當溴酚藍電泳至底部時停止電泳。 2.5 固定 將電泳后的膠板放入固定液中,過夜。 2.6 染色及脫色 于染色液中染色1~2小時,然后置脫色液中進行脫色,直至底色成為無色為止。 2.7 干燥保存 用適宜方法干燥。 3 結果計算 將干燥前或后的膠板用掃描儀于575nm或520nm處對每一樣品進行掃描,得出(或計算出)樣品中F(ab)2的百分含量。